استخدامات الإنزيمات في تنظيف الاخشاب

استخدامات الإنزيمات في تنظيف الاخشاب

 

مـقـدمـة أصبحت الإنزيمات في الوقت الحاضر علما واسعا له خصائصه المهمة من الناحيتين الأكاديمية و التطبيقية شانه شان بقية العلوم الأخرى وذلك لعلاقته الوثيقة بالتغيرات التي تتطرا على المواد والمكونات المختلفة الأصل سواء بروتينية أو سليلوزية أو غير ذلك سواء ان كانت فى حالتها الطبيعية او المصنعة وانطلاقا مما يجب علينا توضيحه والقاء الضوء علي اهمية وميكانيكية تفاعل الانزيمات وانواعها المختلفة واظهار هذا العلم الحديث الذى سوف يكون له صدى كبير فى استخدامه فى الحقل الاثرى ولقد استخدم بشكل كبير فى الصناعة بمختلف اشكالها واساليبها .وان اهم ما يميز تفاعلات الانزيمات انها تحدث داخل الخلية الحية وتكون منظمة ومسيطر عليها بواسطة الانزيم ،ولو اجريت هذه التفاعلات بمعزل عن الانزيم لسارت ببطىء شديد ولاحتاجت الى ظروف أكثر تعقيدا للوصول الى سرعة مكافئة لتلك التى نلاحظها فى وجود الانزيمات ،ومن المنتظر ان يحدث تقدما كبيرا وتطورا فى هذه الدراسات بتطبيقها على جميع المستويات ،ولقلت ما هو موجود سواء من مراجع عربية او رسائل ماجيستير فلقد اتجهنا الى ترجمة مقالات تناولات هذا الموضوع باشكال مختلفة وتم تطويعها للخروج بهذا البحث العلمى المفيد.                                                       الهدف من البحث يهدف هذا البحث العلمى الى معرفة ما هى الانزيمات ومما تتركب تلك الانزيمات وما هى انواعها وكيف يتم حدوث النشاط الانزيمى والعوامل المختلفة  المؤثرة عليه وذلك لكى يصبح المرمم الاثرى ذى علم بذلك المجال لأنه هام جدا فى مجال الآثار بصفة عامة وفى مجال الترميم بصفة خاصة وهذا البحث العملى يتناول استخدامات الانزيمات فى علاج و صيانة وترميم الاسطح الخشبية. 
   

الفصـل الأول  (الإنـزيـمـات)

تعريف الإنزيماتالإنزيمات :-الإنزيمات هي بروتينات ،وتتألف من بين مئات من الأحماض الأمينية ،التي هي من إنتاج الكائنات الحية وهي مسؤولة عن عدد من ردود الفعل والأنشطة البيولوجية في النباتات والحيوانات والبشر والكائنات الحية الدقيقة وجدوا في حقوق الجهاز الهضمي لتحطيم الكربوهيدرات (السكريات) أو البروتينات والدهون الموجودة في الطعام أصغر قطعة يمكن استيعابهم في مجرى الدم ، الإنزيمات يمكن إما إطلاق سرعة رد فعل أو أنها تصل المواد الكيميائية التي تحولت مع مساعدة من الإنزيمات يسمى المواد المكونة. في حالة عدم وجود الإنزيمات ودعا هذه المواد الكيميائية المتفاعلة.خواص الإنزيمات :--         لها خواص البروتينات وتحتوي على مركز فعال واحد او اكثر يسمى بمركز نشاط الإنزيم ( Active site )   .-         تعمل بشكل محدد جداً .-          تؤثر عليها العوامل الفيزيائية والكيميائية وتقلل من نشاطها أو قد تزيد منه .-         تعمل باتجاهين – هدم – بناء .-         الانزيمات اما تكون بسيطه او مركبه والمركبه تتطلب وجود مواد غير بروتينيه ترتبط بها .-   تصنع باستمرار وفي الغالب على شكل مركبات غير فعالة (pro – Enzymes) وتكون مع مركبات أخرى انزيمات فعالة .-         تعمل بشكل قوي عند PH المتعادل وبحد معين في محيط (حامضي أو قاعدي) .-         تتأثر بعوامل عدة (الحرارة ، الأملاح ، المعادن) مما يقلل من عملها الوظيفي .-         تشكل مركبات خاصة داخل الماء (تترسب أو تتجزأ) .-   ومن أهم صفات أى إنزيم تخصصه للعمل على مركب أو مركبات معينة ويتشكل الإنزيم في تركيبه ثلاثي الأبعاد بحيث يقع على سطحه ما يعرف باسم " الموقع النشط" Active site  . (1)
  ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1)             en.wikipedia.orgوظائف الإنزيمات :-- حفظ توازن الجسم عن طريق التحكم بتفاعلاته الكيميائية .
- تتميز بقدرتها الفائقة على تحفيز التفاعلات الكيميائية الحيوية المختلفة للوصول إلى حالة الاتزان.- تعمل الإنزيمات في تقليل كمية الطاقة اللازمة لبدء تفاعل كيميائي وهذا يساعد في حمايتها من التعرض إلى الحرارة العالية التي تؤدي إلى تفكيك بنية البروتين في الجسم . تركيب الإنزيمات :-الإنزيمات هي مركبات بروتينة ،تكون البروتينات جزءاً أساسيا من التركيب الكيميائي للخلايا الحية ،فهي تدخل في تركيب جميع الأغشية الخلوية ،وتشكل أساس تكوين البروتوبلازم ،أى أن الإنزيمات لها دور بالتحكم قي كيمياء الخلية وبشكل دقيق الإنزيم هو العامل المساعد الذي يؤثر على سرعة التفاعل .وتحتوى البروتينات على عنصر النيتروجين ،بالإضافة إلى الكربون و الهيدروجين والأوكسجين .وتحتوى بعض البروتينات على الكبريت و الفسفور وتعرف الوحدات البنائية للبروتينات باسم أحماض أمينية " Amino acids" و يدخل في بناء البروتينات النباتية والحيوانية والميكروبية عشرين حمضا أمينيا يرمز لكل منها  بثلاثة حروف أو حرف واحد (أنظر الجدول)  ولكل حمض أميني مجموعة أمينية NH2و مجموعة كربوكسيليه COOH ، وذلك وفق التركيب الأساسي الآتي:
 
ويختلف بناء المجموعة (R)من حمض أميني إلى آخر ففي الحمض الأميني "جليسن"  Glycine تكون المجموعة Rهي ذرة هيدروجين(H) وفى الحمض الأميني آلانين Alanine تكون المجموعة R هى CH3 وفى الحمض الامينى فالين VALINE تكون المجموعة R هىC3H7 وهكذا .(1)
  وتتميز الإنزيمات بأدائها السريع ،ومن أسرع الإنزيمات فى أداء دورها إنزيم كاتاليز catalase الذى يقوم بتكسير H₂O₂ إلى ماء وغاز الاوكسجين ويمكنك ان تجرب ذلك بنفسك وضع قطعة من كبد (غنية بهذا الإنزيم) فى إناء يحتوى على سائل  H₂O₂إذ سرعان ما تجد فقاعات الأوكسجين تتصاعد وتملأ الإناء ولا تتسبب التفاعلات التى تعمل عليها الإنزيمات فى إتلاف هذة الإنزيمات ،ولكن يلاحظ أن الإنزيمات يمكن أن يتعطل أداءها وتبطل فعالياتها تحت تأثيرعوامل مثل الحراره ودرجه الأس الهيدروجينى pH وغير ذلك .(2)
 ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1) www.fpl.fs.fed.us(2) M.K.Schumm and Margor, K.Shumm:Understanding organic, Chemistry, 1987. النشاط الإنزيميمبنى الانزيم والموقع الفعال :الانزيمات هي عباره عن بروتينات ( ان البروتين هو مركب عضوي عباره عن سلسله مكونه من وحدات تدعى احماض امينيه المرتبطه ببعضها بأربطه بيبتيديه ) . المبنى الفراغي للانزيم (الرباعي) هو الذي يؤهل الانزيم بالقيام بعمله الخاص . بعض الانزيمات تعمل بوجدود مساعد(مرافق الانزيم Co-Enzyme )  خاص مثل ايونات مختلفه كالحديد او المغنيسيوم او الكالسيوم التي بدونها الانزيم غير قادر على اتمام مهمته :
Co – enzyme      +       APo – enzyme à         Haloenzyme
انزيم كامل            à       انزيم مجرّد           +      مساعد (مرافق الانزيم)
 الموقع الفعال (Active site ) :
لكل انزيم تركيب خاص ودقيق, يميزه عن غيره وفي كل انزيم مركز منشط او اكثر مسؤول عن قيام الانزيم بعمله حيث يتلاءم الموقع الفعال هذا مع نوع مادة الاساس  (substrate) التي يعمل عليها الانزيم , التي ترتبط في هذا المكان . بالبدايه ترتبط مادة الاساس بالانزيم فيتكون مركبا "معقدا" مؤقتا (Enzyme-Substrate Complex). ثم يتحلل المركب المعقد المؤقت ليكون نواتج ويتحرر الانزيم :
 


الانزيم    +      الناتج   مركب معقد مؤقت       مادى الاساس         الانزيمالجدير بالذكر أن المواد المتفاعلة أو الداخلة في التفاعل الكيميائي لا بد أن تنشط قبل أن تدخل في التفاعل ويتطلب هذا التنشيط قدراً من الطاقة يطلق عليها اسم ( طاقة التنشيط اللازمة للتفاعل ).والدور الذي تقوم به الإنزيمات هو الإقلال من طاقة التنشيط اللازمة للتفاعل ، أي اتمام التفاعل بأقل كمية مكلفة من الطاقة فحين تقل كمية الطاقة التنشيطية اللازمة للجزيء من مادة التفاعل فإن عدد أكبر من الجزيئات ينشط ويدخل في التفاعل والذي تزداد بذلك حركته ،أما في وجود الإنزيم فإنه يدخل مع مادة التفاعل في اتحاد كيميائي مكوناً مركباً مؤقتاً ينشط بكمية ضئيلة من الطاقة ( الحرارة مثلاً ) إذا ما قورنت بالطاقة اللازمة لتنشيط مادة التفاعل نفسها في غياب الإنزيم ، وبعد ذلك يتحلل هذا المركب المؤقت ( E + S ) إلى نواتج التفاعل وينطلق الإنزيم ليعيد نفس الدورة مع جزيء جديد من مادة التفاعل . (1)
 
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1)       www.centcom-hdm.orgالعوامل المؤثرة على النشاط الإنزيميهناك عدة عوامل تؤثر على سرعة عمل الانزيمات منها :-        تركيز الإنزيم  تتناسب سرعة التفاعل تناسبا طرديا مع زيادة تركيز الانزيم اي كلما كان تركيز الانزيم اعلى كلما زادت سرعة التفاعل.-        تركيز مادة الأساس :-
كذلك الامر بالنسبه لتركيزمادة الاساس فتتناسب سرعة التفاعل تناسبا طرديا مع زيادة تركيز مادة الاساس اي كلما كان تركيز مادة الاساس اعلى كلما زادت سرعة التفاعل.-        درجة الحرارة :-
تتؤثر درجة الحراره بطريقتين:-       ارتفاع درجة الحراره يزيد من سرعة حركة الجزيئات وبالتالي ازدياد احتمال تصادف الانزيم مع مادة الاساس .-   زيادة سرعة تخثر الانزيم بسبب ارتفاع درجة الحراره  كون الانزيم هو بروتين حيث تؤدي الحراره العاليه الى هدم المبنى الفراغي وفقدانه وظيفته درجة الحراره 37 مئويه عادة هي درجة الحراره المثلى(Optimal Temp) لعمل الانزيم ,في حين ان درجة حراره منخفضه تسبب لوقف عمل الانزيم .-درجة الحموضة :-تتاثر الانزيمات بتغير درجة ال pH الدرجه الاكثر مفضله هي درجة الحموضه التي يكون نشاط الانزيم الاعلى بها وهي درجة الـ pH المثلى ودرجة درجة pH  متطرفه عاليه او متطرفه منخفصه عادة تفقد الانزيم فعاليته حيث ان درجة الحموضه هي ايضا عاملا محددا لاستقرار تركيب الانزيم. (1)
 (1)       يحيى حسن فودة : نظم الانزيمات وتطبيقاتها ،الطبعة الاولى ،الدار العربية للنشر ،القاهرة ،1998 , صـ 38 : 68 . 

تخصص المواد التى تؤثر عليها الانزيمات  يمكننا التعرف على تخصص الانزيم فى المعمل باختبار تاثير الانزيم على المركبات الكيميائية المشابهة تركيبا مع المادة الطبيعية التى يؤثر عليها الانزيم و لبعض الانزيمات تخصص مطلق بالنسبة الى تاثيرها على مركب واحد فقط مثال ذلك انزيم سكسينات ديهيدروجينز وانزيم الفيوماريز و التى تحفز التحول العكسى لمركبات السكسينات الى الفيومارات و الفيومارات الى المالات على التوالى ولبعض الانزيمات تخصص اكثر اتساعا و مثال ذلك انزيم التربسين الذى يحفز التحلل المائى ( التميؤ ) لروابط الببتيد و الاميد و الاستر والتى يشارك فى تكوينها الليسين او الارجين .  وعلى الرغم من انه يمكن تحليل أنواع اخرى من الروابط باستخدام عناصر الماء الا ان انزيم التربسين له تخصص معين بالنسبة الى المجاميع ( R ) الموجودة فى كل من الليسين و الارجين وبناء على ذلك فمشتقات الهومو ارجين والاورنيثين مع الفا – N – بنزويل أميد ليست بمركبات تستطيع ان يؤثر عليها الانزيم ، فى حين ان نفس المشتقات الناتجة فى الارجين والليسين يمكن ان تتحلل مائيا و بسرعة و بنفس الانزيم لتعطى ( N-benzylamino acid + NH3 ) وجدير بالذكر ان الهومو ارجينيى يختلف عن الارجينين فى وجود مجموعة ( CH2 ) – زائدة ، كما ان الاورنيثين يختلف عن الليسين فى انه ينقص عنه بمجموعة ( CH2 ) واحدة .
  وقد اظهرت دراسات علم البللورات تخصصا بين المجموعة الايونية الموجبة ( الكاتيونية الموجودة فى المادة المتفاعلة مع الانزيم ) وبين المجموعة الايونية السالبة الموجودة فى مراكز نشاط الانزيم و فى حالة ازاحة مكان المجموعة الايونية الموجبة بواسطة مجموعة ch2  واحدة بعيدا عن الرابطة الاميدية الحساسة فان الظروف لا تسمح بالارتباط الصحيح مع المادة المتفاعلة أو انفصال مجموعة الاميد بواسطة عملية الحفز الانزيمى .(1)
وهناك انزيمات اخرى تتعامل مع مركبات عديدة ذات تخصص أكبر من حيث المواد التى تؤثر عليها و مثال ذلك انزيم ليوسين امينو ببتيديز الذى يحلل الكثير من أميدات الاحماض الامينية من نوع ( الفا – ل ) تحليللا مائيا ، و كذلك الببتيدات الثنائية ويتم ذلك بسرعات مختلفة .  وتوضح تخصصات الانزيمات السابقة ان سرعة تعامل الانزيم مع المادة التى يؤثر عليها تتوقف على حجم وشكل وكذلك الخصائص الكيميائية للمجاميع الموجودة بها كما ان هناك من الادلة فى الوقت الحاضر ما يدل على ان عملية الربط المتكامل بين المادة التى يؤثر عليها الانزيم ومركز نشاط هذا الانزيم قد تتضمن تفاعلات متداخلة هيدروفوبية وكهروستاتيكية بالاضافة الى عملية الارتباط بواسطة روابط هيدروجينية و فى بعض الحالات تكون مركبات وسيطة تساهمية فى تراكيب الانزيم مع المادة التى يؤثر عليها ولكن يتم ذلك بصورة مؤقتة وبناء على ذلك تدخل كل مجاميع المادة المتعاملة الى حيث مركز النشاط الانزيمى بطريقة محكمة ، بحيث تواجه كل مجموعة من مجموعات المادة المتفاعلة المجموعة المكملة لها فى مركز نشاط الانزيم . طرق حفز سرعة التفاعلات الكيميائية بواسطة الإنزيمات :-تعمل الانزيمات على خفض طاقة تنشيط التفاعل الكيميائى و بذلك تعمل على زيادة سرعة التفاعل الكيميائى ، هذا و يجب الاطلاع على هذه الزيادة فى السرعة فى اطار الاحداث الكيميائية التى تجرى عند تفاعلالانزيم مع مادة التفاعل المادة الثانوية علميا وهذه الاساليب فى الحقيقة تشبه الى حد كبير الاساليب التى تحدد تخصص الانزيم بالنسبة للمادة التى يؤثر عليها .حفز السرعة و تخصص المواد التى تؤثر عليها الإنزيمات :-فى حالة التفاعلات الانزيمية تجرى تفاعلات كيميائية معينة تناظر تفاعلات مماثلة فى الكيمياء العضوية .و يعتبر تخصص المواد التى تؤثر عليها الانزيمات عاملا فريدا فى التفاعلات الانزيمية ، و يوحى اسلوب العمل فى كثير من الانزيمات ان طاقة الارتباط المتخصص ( فى التفاعلات المتعددة التى تحدث بين المجاميع المتكاملة فى المواد المتفاعلة و مركز نشاط الانزيم) تستخدم كقوة تدفع عملية الحفز وتخفض طاقة التنشيط وبالتالى تزيد من سرعة التفاعل بدرجة كبيرة و تظهر هذه العوامل بوضوح فى حالة انزيم فوسفو جلوكو ميوتيز . (2)
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1) عبد الله ثابت ، أحمد: اسس الكيمياء الحيوية ، الجزء الاول ، الطبعة الاولى ، ليبيا ، جامعة عمر المختار ، 1991 . (2)يو . فيليبو فيتش : اسس الكيمياء الحيوية ، مرجع سابق ، ص 386 : ص 396 .
 

 الفصل الثاني استخدامات الإنزيمات في الحقل الأثري تطبيقا على الاسطح الخشبية 
تمهـيد استخدمت الانزيمات فى حقل ترميم وصيانة المواد الاثرية بجميع انواعها وذلك بتطويعها فى عمليات تنظيف الاسطح الاثرية وازالة الرواسب والاتساخات والبقع والورنيشات القديمة من فوق اسطح مواد الاثار ،فقبل مائة عام لا يعرف عنه إلا القليل الانزيمات وكيفية عملها اليوم لدينا معلومات وفيرة عن هيكلها وطريقة نشاطها ولكن ليس النهاية حيث تم اكتشاف طرق جديدة فى تنظيف الاسطح الملونة ومن هذه الطرق استخدام الانزيمات فى ازالة الرواسب والورنيشات القديمة والاساخ المختلفة من فوق السطح الخشبية ,واستخدمت الانزيمات ايضا فى اذابة واحلال اللواصق القديمة وتنظيفها ,واستخدم اخرون الانزيمات فى تنظيف مواد الاثار والاعمال الفنية.والصيانة منذ فترة طويلة باستخدام الإنزيمات تقوم بدورها في تسهيل انهيار التراكمات القديمة ولصق الغراء ,وعلم الانزيمات من العلوم المفيدة فى عملية الصيانة فى المستقبل.
   وإن العلم الذي يتناول دراسة الإنزيمات من العلوم المستقبلية التي سوف يكون لها شأن كبير في  ترميم وصيانة الاثار الخشبية ,وهذا ما جعلنا نتناول هذا الجزء من البحث وتطبيقه على الاخشاب ،وأيضا تمثل الإنزيمات كعامل تلف إلى جانب استخدامها في الترميم حيث أن الإنزيمات ينتج عن عملية التغذية وهذه النواتج التي تسبب في تلف الاخشاب .
 أمثلة على الانزيمات المستخدمة في عمليات التنظيف :1)  وهو يمثل منتجاً خاصاً يستخدم في إزالة البروتينات ويجب أن تكون درجة حرارة الحمام من ⁵40: D⁵ والـPH = V ودرجة التركيز من 2: D⁵ جم/لتر من 1:4 ساعات.
2)    Viveral: WB,AB
وهذه الانزيمات قادرة على تحويل النشا إلى سكر ودرجة الحرارة المثلى له -⁵5±⁵55 ولكن أيضاً نشط في حدود من 20:25 درجة مئوية أما درجة الفيفرال WB فتكون من Dإلى 7جم/م اما تركيز الفيفرال WB من 4:6جم/م² اما الفيفرال المركز جداً من 3:4جم/لتر من 1:4 ساعات للجميع ويجب أن تستخدم دائماً كمية كبيرة من السائل مناسب مع حجم النسيج المراد تنظيفه كذلك يفضل تجديد الحمام في الوقت المناسب أفضل من ترك الانسجة اكثر من 3 ساعات في حمام إزالة المواد اللاصقة أد الغراء . (1)
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1) يوملبوفيش- يو . فيليبو فيتش : اسس الكيمياء الحيوية ، دار مير للطباعة ، الجزء الاول ، موسكو ، ترجمة : حسن معوض ، 1980 . الإنزيمات في تنظيف الاسطح الخشبيةمن المعروف ان الانزيمات هى مواد معقدة وسيطة تهضم المواد العضوية المعقدة الغير ذائبة محولة اياها الى مواد بسيطة قابلة للذوبان فى الماء و على سبيل المثال :§        يحول انزيم البروتييز البروتين الى أحماض امينية .§        يحول انزيم الدياستيز النشا الى سكريات بسيطة .§        يحول انزيم الليبيز الدهون الى مستحلبات دهنية .وقد استخدم لاوندريس (Laundries) الانزيمات لازالة البقع من سطح الاخشاب خاصة ذات الاصل البروتينى (مثل بقع الدم) وقد صادفت تجاربه نجاحا ملحوظا.(1)
وقد استخدم Wendelbo   (1976) التنظيف بالانزيمات فى اغراض صيانة المخطوطات وعلى الالواح الخشبية والكتب والوثائق ونجح فى ازالة العديد من البقع ,والانزيمات هى غالبا مواد معقدة غالبا ما تشبة البروتينات زمعظم الانزيمات تككون من جزئين وثيقى الارتباط احدهما بروتينى والاخر غير بوترنى يطلق علية اسم المجموعة الفعالة Active Group  وتعتبر الانزيمات عوامل مساعدة تعمل على زيادة سرعة التفاعلات الكيميائية الحيوية من 1000000 الى 1000000000000 وذلك بالمقارنة مع سرعة هذه التفاعلات فى حالة عدم وجود عوامل مساعدة ويتاثر نشاط الانزيم بقيم الاس الهيدروجينى وتتخصص الانزيمات ى التاعلات الكيميائية التى تنشطها. وهذا التخصص قد يكون تخصصا مطلقا وهو قليل الوجود او قد يكون تخصص مجموعة بمعنى ان الانزيم يساعد عده تفاعلات كيميائية متشابهة مثل :
-         مجموعة انزيم ليبيز Lipases  المتخصصة ى تحليل المواد الدهنية فقط .-         مجموعة انزيم البروتيز Proteases  والمتخصصة فى تحلل البروتين .-         كجموعة انزيم اميليز Amylases  والمتخصصة فى تحليل المواد النشوية.والانزيمات مواد رخيصة وسهلة الاستخدام وليس لها تاثير ضار عند شطفها جيدا بعد استخدامها حيث تذوب فى الماء ولكنها لاتذوب فى المذيبات العضوية والانزيمات افضل من عوامل الاكسدة والاختزال والاحماض التى تستخدم احيانا فى تبيض البقع.(1)قد استخدم التنظيف بالانزيمات على نطاق واسع خلال الفترة الاخيرة خاصة فى تنظيف الاتساخات البروتنية مثل الشحوم الدهون واللواصق والورنيشات والبقع الفطرية والبكترية التى توجد على الرسوم والزخارف الملونة على الاخشاب.الانزيمات عبارة عن مركبات بروتنية (مواد عضوية معقدة) وزنها الجزئى مرتفع تستخدم كعامل مساعد فى التفاعلات وتعمل الانزيمات على تكسير او هضم المواد العضوية المعقدة الى مواد بسيطة تذوب فى الماء وتؤثر الانزيمات على سرعة التفاعل فقط دون التاثير على طبيعة النواتج.وقد تم استخدام انزيم لعاب الفم على الطبقة الملونة على سطح التابوت الخشبى رقم 6152 لتنظيفة من الاتساخات التى وجدت مغطاه لمعظم زخارف السطح  واعطى هذا النوع من التنظف نتائج مرضية.وهى طريقة مضمونة النتائج وليس لها اى مخاطر على طبقة اللون او على صحة المرمم مثل المخاطر الناتجة عن استخدام المذيبات العضوية المختلفة.(2) ولكن صعوبة تطبيق الانزيمات فى تنظيف البقع يرجع الى انه لكل انزيم وسط خاص به حتى يعمل بنجاح (من درجة حموضة معينة pH) وكذلك درجة تركيز معينة لبعض الاملاح فى الوسط ايضا يعمل كل انزيم عن درجة حرارة خاصة به ، لذلك يجب ضبط هذه الظروف والاحتفاظ بها فى هذه الحالة طوال مدة عمل الانزيم وعلى سبيل المثال فان هضم البروتينات يحتاج الى وسط حمضى ،بينما هضم النشويات يحتاج الى وسط قلوى ضعيف وهكذا.
ومن مزايا استخدام الانزيمات فى تنظيف الاسطح الخشبية بصفة خاصة هى ان الانزيمات متخصصة ،أى تعمل فقط على مواد محددة ولا تؤثر على ماداها .(3)
وعموما فانه يمكن القول بان استخدام الانزيمات فى تنظيف وازالة البقع لا يزال فى مجال التجارب العلمية ومرحلة التطور الى الافضل بفضل التطور العلمى الهائل وايضا ادخال وسائل التكنولوجيا الحديثة على هذا المجال ،ولم ينتشر بعد .(4)
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ(1)  دراسة علمية لاستخدام التقنيات الحديثة فى ترميم وصيانة المخطوطات الاثرية الاسلامية المصورة تطبيقا على بعض النماذج المختارة ,د.امانى محمد كامل ابراهيم كرورة ,2001 ,صـ172:173.(2)  دراسات فى علاج وصيانة التوابيت الخشبية الحاملة للطبقة اللونية مع تطبيقات عملية فى هذا المجال ,رسالة دكتوراه , عليه محمد عطية عبد الحميد غالى .صـــ 201:20(3)  حسام الدين عبد الحميد ,المنهج العلمي لعلاج وصيانة المخطوطات والأخشاب والمنسوجات الأثرية – جامعة القاهرة ,كلية الآثار ,قسم الترميم ,القاهرة ، 1984  ,ص 141 ، ص 142(4) www. wikipedia.org 
المراجـــــــع -         حسام الدين عبد الحميد – المنهج العلمي لعلاج وصيانة المخطوطات والأخشاب والمنسوجات الأثرية – جامعة القاهرة – كلية الآثار – قسم الترميم – القاهرة ، 1984 .
-         يحيى حسن فودة : نظم الانزيمات و تطبيقاتها ، الطبعة الاولى ، الدار العربية للنشر ، القاهرة ، 1998 .-         يو . فيليبو فيتش : اسس الكيمياء الحيوية ، دار مير للطباعة ، الجزء الاول ، موسكو ، ترجمة : حسن معوض ، 1980 .-         حسام الدين عبد الحميد – المنهج العلمي لعلاج وصيانة المخطوطات والأخشاب والمنسوجات الأثرية – جامعة القاهرة – كلية الآثار – قسم الترميم – القاهرة ، 1984-         امانى محمد كامل ابراهيم كرورة ,دراسة علمية لاستخدام التقنيات الحديثة فى ترميم وصيانة المخطوطات الاثرية الاسلامية المصورة تطبيقا على بعض النماذج المختارة ,2001-         عبد الله ثابت ، أحمد: اسس الكيمياء الحيوية ، الجزء الاول ، الطبعة الاولى ، ليبيا ، جامعة عمر المختار ، 1991 .-         دراسات فى علاج وصيانة التوابيت الخشبية الحاملة للطبقة اللونية مع تطبيقات عملية فى هذا المجال ,رسالة دكتوراه ,عليه محمد عطية عبد الحميد غالى . -        Victor W.Rodwell;Enzymes,General Properties.in Harper's Brochemistry . Middle east edition,2000 .-        M.K.Schumm and Margor, K.Shumm:Understanding organic, Chemistry, 1987. مواقع الأنترنت : www.rsc.orgwww.answers.comwww.cleaning101.comwww.rdesignconsultations.comwww.scientificjournals.comwww. wikipedia.en.orgwww.biology.usu.eduwww.orianit.edu-negev.gov.il